FIGURA 1. CULTIVO IN VITRO
2.1.1 AREAS DEL LABORATORIO DEL CULTIVO DE
TEJIDOS
Un
laboratorio de cultivo de tejidos se puede dividir esquemáticamente en áreas
separadas para las diferentes funciones que se desarrollan en el.
Las áreas
o secciones principales son:
v Área de preparación; se
utiliza para preparar los medios de cultivo, en este se almacenan materiales de
vidrio y de plástico así como reactivos químicos. Debe de contar con mesa de
trabajo, para colocar balanzas, el medidor de pH, los platos calientes con agitación
y otros elementos, incluye vitrinas, estanterías, espacio para el equipo de refrigeración,
incubadora y cámara de crecimiento.
FIGURA 2. MESA DE TRABAJO
FIGURA 3 MEDIDOR DE pH
v Área de lavado y de esterilización; puede
estar constituida por dos áreas conectadas entre si. Esta debe incluir por lo
menos un lavadero grande con agua caliente y fría y una fuente de agua de alto
grado de pureza (agua doble destilada, para la cual se usa un destilador de
vidrio o de material no toxico y un desionizador de agua. En esta área se debe
disponer de un espacio para almacenar agua destilada en botellas de plástico. Esta
área debe tener un espacio para la autoclave vertical u horizontal, también se
puede incluir el espacio para estufa, secadores y un lavadero con agua caliente
y fría.
FIGURA 4. OLLA DE PRESION
v Área de transferencia; aquí
se realiza el trabajo de excusión, inoculación y transferencia de los explantes
a los medios de cultivo. Se recomienda la instalación de gabinetes de flujo
horizontal o vertical de aire filtrado bajo presión o la construcción de
cuartos de transferencia.
FIGURA 5. CAMAPANA DE FLUJO LAMINAR
Los gabinetes de flujo laminar deben
ubicarse, en lo posible, en un lugar alejado de las puertas y con un mínimo de
corriente de aire, con el fin de prolongar la vida útil de los filtros.
v Área de incubación; los
cultivos son incubados en un cuarto apropiado o en gabinetes o en cámaras de
crecimiento. Esta área debe proporcionar un buen control de temperatura (20-28 oC),
de iluminación (variable según las necesidades: 1000 a 5000 lux) y de humedad
relativa (70%-80%).
FIGURA 6. ESTANT DE METAL
En el cuarto de incubación se instalan estanterías
metálicas o de madera para colocar los cultivos. Esta área debe incluir además,
un espacio para cultivos en agitación y
para cultivos estáticos en la oscuridad. Es conveniente apropiar una buena distribución
del aire en este cuarto para evitar zonas de recalentamiento por efecto de las
luces. La regulación de la temperatura se logra con aparatos de aire
acondicionado de pared o de sistema central.
FIGURA 7. ESTANT CON CULTIVOS
v Área de observación y de examen; aquí se localizan
microscopios (estéreo, compuesto, invertido y otros). El objeto de esta área es
realizar observaciones periódicas de los cultivos tanto en medios semisólidos como
en líquidos.
FIGURA 6. MICROSCOPIO
Estas
áreas descritas anteriormente se pueden considerar como el núcleo del laboratorio
de cultivo de tejidos. Mientras que los laboratorios de investigación,
desarrollo y los de producción comercial deben contar, además, con las
siguientes instalaciones:
v Área de crecimiento; las
plantas generadas en el área de incubación se pueden trasplantar en macetas,
bandejas o camas apropiadas. Después del trasplante, las plantas generalmente necesitan
un acondicionamiento gradual a las condiciones de campo, el cual se puede
lograr con nebulización, cámaras húmedas de plástico etc.
FIGURA 8. MACETAS PARA TRASPLANTE
v Área de cuarentena y de control fitosanitario; se
necesita un área de para la recepción de las muestra o de las plantas
destinadas a la limpieza clonal generalmente protegida contra insectos. Esta área
debe estar separada del resto del laboratorio. Por otra parte el área de
control sanitario se realizan pruebas necesarias para comprobar la sanidad del
material vegetal, como enfermedades causadas por virus, hongos y bacterias.
v Área de oficina; aquí
se ubican escritorios, archivos y almacenamiento de datos, los libros de
referencia y de control de laboratorio, los catálogos y otros documentos, así
como equipo de computo.
FIGURA 9. AREA DE RECEPCION
2.1.2 MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO
Suponiendo
que se establecerá un laboratorio de cultivo de tejidos de tamaño medio, se
requieren, para ponerlo en funcionamiento, las siguientes piezas de equipo
estándar:
v Área de preparación; refrigerador,
balanzas (una macrobalanza y una de precisión), potenciómetro, plancha
eléctrica con agitador magnético, frascos Erlenmeyer (125, 250 y 500 ml.),
botellas y material de vidrio o plástico.
FIGURA 10. REFRIGERADOR
FIGURA 11. BALANZA ANALITICA
FIGURA 12. PLANCHA ELECTRICA
FIGURA 13. CRISTALERIA
v Área de lavado y de esterilización; autoclave
manual o automático (grande o de mesa), destilador de vidrio, gradillas para
secado, bandejas de aluminio y de plástico de varios tamaños, recipientes de
plástico grandes, estufas para la esterilización y secado.
v Área de transferencia;
gabinete de flujo laminar, microscopio de disección con luz incidente, e
instrumentos de disección: cuchillas No. 10 y No. 11, mangos para cuchillas,
agujas de disección, pinzas, tijeras, navaja de afeitar, frascos con alcohol,
mechero de alcohol, mascaras guantes, marcadores a prueba de agua, bandejas y
tacho para basuras.
v Área de incubación; el cuarto
debe estar acondicionado con temperatura, iluminación y humedad relativa
controladas, estanterías con iluminación para los cultivos, bandejas, termómetros
de máxima y mínima y gradillas para tubos de varios tamaños.
v Área de examinación;
microscopio estereoscópico, microscopio compuesto, lentes de aumento y lentes ópticos
complementarios.
v Área de crecimiento in vivo; macetas,
suelo, bandejas, cámaras de alta humedad.
2.1.3 GENERALIDADES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Solución
químicamente definida donde las plantas o explantes encuentran las condiciones
necesarias para desarrollar su potencial intrínseco.
COMPUESTOS
INORGÁNICOS
Macronutrientes
|
Micronutrientes
|
NO3-
|
Fe2+
|
PO43-
|
Cu2+
|
K+
|
Zn+
|
Ca2+
|
Mn2+
|
Mg2+
|
Mo2+
|
SO42-
|
Co2+
|
|
I-
|
COMPUESTOS ORGANICOS
Carbohidratos
|
Vitaminas
|
Aminoácidos
|
Reguladores de crecimiento
|
Sacarosa
|
Tiamina (B1)
|
Glicina
|
Auxinas
|
Glucosa
|
Piridoxina
|
|
Citosinas
|
Mio- inositol
|
Acido nicotinico
|
|
Giberelinas
|
|
Biotina
|
|
|
.
SOPORTE INERTE MEDIOS
SEMISOLIDOS
pH
ESTERILIZACIÓN
1 atmósfera
|
15 a 20 minutos en
autoclave
|
Agua destilada
|
2.1.4 COMPONENTES DEL MEDIO DE CULTIVO
En
la actualidad existen innumerables formulaciones cada una de las cuales
contiene entre 15 y 35 compuestos químicos que suministran:
a)
Carbono
b)
Nutrimentos
minerales
c)
Vitaminas
d)
Agente
gelificante
e)
Sustancias
reguladoras de crecimiento
f)
Otros
compuestos
Fuentes
de carbono. Muy pocos cultivos in vitro son autótrofos, y por lo tanto es
necesario agregar al medio una fuente de carbono. La sacarosa (2% a 5%) es el azúcar
que mas se utiliza, y se puede remplazar por la glucosa y en menor medida por
fructosa.
FUENTES DE CARBONO
Muy pocos
de los medios de cultivo in vitro son autótrofos, y por lo tanto es necesario
agregar al medio una fuente de carbono. La sacarosa (2% a 5%) es el azúcar que
mas se utilizada, y se puede remplazar por glucosa y en menor medida por fructosa;
en general, la maltosa y la galactosa son menos efectivas. La incorporación de
mioinositol al medio (100 mg/litro) generalmente da como resultado un mejor
crecimiento de callos y suspensiones celulares.
NUTRIMENTOS MINERALES
Cualitativamente
los medios de cultivo aportan los mismos elementos (macro y micronutrimrntos)
que se consideran esenciales para el crecimiento de las plantas enteras. En los
medios de reciente desarrollo (MS, B5, N6) cabe destacar las concentraciones
relativamente altas de nitrógeno y potasio con respecto al medio de White. El nitrógenos
suministra en forma de nitrato o solo amonio como fuente nitrogenada, en este
ultimo caso el medio debe contener también acido cítrico, succínico o málico. Otras
fuentes de nitrógeno incluyen glutamina, urea y caseína hidrolizada.
Los medios
de cultivo contienen fosforo, calcio, magnesio y azufre en concentraciones de 1
a 3 mM. La adición de hierro conjuntamente con un agente quelatante (Na2 EDTA)
lo hace disponible en un amplio rango de pH.
VITAMINAS
Son
también empleadas por ellas para su crecimiento y diferenciación con papeles catalíticos
en el metabolismo.
Las vitaminas que son adicionadas más
usualmente como parte del medio sintético son: tiamina-HCl, ácido nicotítico,
piridoxina-HCl, biotina, ácido fólico, ácido pantoténico, riboflavina.
AGENTE GELIFICANTE
En los
medios semisólidos comúnmente se le adiciona agar (0.6% a 1.0%). Se debe
considerar especialmente la pureza del agar, la marca comercial y las
concentraciones de agar utilizado pueden alterar las respuestas in vitro de los
cultivos ( Debergh, 1982).
REGULADORES DE CRECIMIENTO
En algunos
casos se obtienen en los cultivos in vitro las respuestas deseadas mediante el
empleo del MS sin reguladores de crecimiento.
Sin embrago en la mayoría de los casos se hace necesario agregar al
medio sustancias reguladoras de crecimiento, generalmente del tipo auxinas o
las citocininas.
Auxinas
Se emplean básicamente como promotores de la
proliferación celular y la inducción de la morfogénesis.
Funciones
v Alargamiento y división celular
v Crecimiento de secciones
de hojas, tallos y frutos
v Formación de raíces
adventicias
v Dominancia apical
v Acción herbicida
v Estimulación de la
producción de etileno
Auxinas
naturales: De acuerdo con su naturaleza, el ácido indolacético (AIA) es la
única auxina natural que se localiza en las zonas de crecimiento.
Auxinas
sintéticas: Son auxinas sintéticas del ácido naftalenacético (ANA), ácido 2,4
diclorofenoxiacético y ácido indolbutírico (AIB). La primera y la tercera
hormona forman parte de los productos que se utilizan como enrizadores.
Citocininas
En combinación con las
auxinas, determinan diferentes respuestas morfogenéticas.
Funciones
v Promoción de la división celular
v Promoción de la organogénesis (relación auxinas/citocininas)
v Retardo de la senescencia
v Síntesis de clorofila y desarrollo de cloroplastos
Citocininas naturales: Zeatina (Zea) y la 6 Isopenteniladenina (2iP)
Citocininas
artificiales: 6-benciladenina (6 BA) o también conocida como
bencilanimopurina (6 BAP); la cinetina (K) también conocida como 6-furfiril
aminopurina (FAP).
Giberelinas
Giberelinas se utilizan para
favorecer el crecimiento y el alargamiento de los entrenudos de los brotes de
novo.
Funciones
v Promoción del crecimiento en plantas de genotipos
enanos o plantas bianuales
v Crecimiento de yemas latentes
v Germinación de semillas en dormancia
v Floración
v Movilización de reservas en la semilla.
v Promueven el desarrollo de los frutos
v Estimulan la síntessis de mRNA (RNA mensajero)
Las giberelinas,
especialmente el AG3, han demostrados ser necesarias para el cultivo
de ápices o meristemas caulinares de varia especies vegetales.
OTROS COMPUESTOS
Existe
una larga lista de componentes que se han adicionado ocasionalmente a a los
medios de cultivo por ejemplo:
v Agua
de coco
v AC
v Jugo
de frutos de tomate
v Extracto
de levadura
v Extracto
de tubérculos de papa
v Aminoácidos
(asparagina, cisteína y L-tirosina)
v Ácidos
orgánicos (cítrico, málico, succínico y pirúvico)
v Sustancias
antioxidantes (acido ascórbico, L- cisteína y plivinilpirrolidona)
2.1 .5 PREPARACION Y MANEJO DE SOLUCIONES STOCK
La composición de una
solución se debe medir en términos de volumen y masa, por lo tanto es
indispensable conocer la cantidad de soluto disuelto por unidad de volumen o
masa de disolvente, es decir su concentración. Durante cualquier trabajo
experimental, el uso de soluciones se hace indispensable, por lo que es
necesario conocer los procedimientos para su elaboración. En la presente
práctica se realizarán soluciones utilizando como concentración la molaridad,
la normalidad y las relaciones porcentuales.
Una solución es
una mezcla homogénea cuyas partículas son menores a 10 ángstrom. Estas
soluciones están conformadas por soluto y por solvente. El soluto es el que
esta en menor proporción y por el contrario el solvente esta en mayor
proporción. Tosas las soluciones son ejemplos de mezclas homogéneas.
v Solución diluida es cuando la
cantidad de soluto es muy pequeña.
v Solución concentrada es cuando
la cantidad de soluto es muy grande.
v Solución saturada es cuando se
aumento mas soluto en un solvente a mayor temperatura de la normal (esto es
porque cuando ya no se puede diluir, se calienta el solvente y se separan sus
partículas para aceptar mas soluto)
v Solución sobresaturada es
cuando tiene más soluto que disolvente.
DILUCIÓN DE SOLUCIONES Y
SOLUCIÓN STOCK
Para diluir una solución es
preciso agregar más % de disolvente a dicha solución y éste procedimiento nos
da por resultado la dilución de la solución, y por lo tanto el volumen y
concentración cambian, aunque el soluto no.
Entonces por una solucion stock se entendera como aquella solucion concentrada de nutrientes o de fitohormonas.
EJEMPLOS:
1. PREPARAR 5 L DE MEDIO MS (1X)
CON 0.5 PPM DE ANA DE UNA SOLOCION A 100X
SOLUCION
V1C1= V2C2 V2=
V1C1/ C2
V1= 5000 ml
C1= 1X
V2=
C2= 100X
V2= 5000ml X 1 X/ 100X= 50 ml= 0.05 l
ANA
V1= 5000 ml
C1= 0.5 PPM
V2=
C2= 1000PPM
V2= 5000ml X 0.5 PPM/ 1000PPM= 2.5 ML
SACAROSA 30g x L
PARA 5 L 150 g
PHYTAGEL 2.7 g x L
PARA 5 L 13 g
2.1.6 PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Es necesario preparar el
medio de cultivo utilizando agua bidestilada o agua desmineralizada-destilada. Se
debe evitar el almacenamiento prolongado
del medio para evitar la acumulación de contaminantes; todas las
sustancias utilizadas para su preparación deben ser de un alto grado de pureza.
El procedimiento para la preparación
de los medios dependerá, en primera instancia, del tipo de medio, de su
consistencia y de la presencia de compuestos termolábiles. En general se pueden
distinguir:
b)
Medios líquidos con sustancias termolábiles. Para su preparación se sigue el
mismo del inciso a, pero sin adicionar agar, y haciendo la esterilización por filtración,
en el caso de medios que contengan sustancias termolábiles.
c) Medios
semisólidos con una o más sustancias termolábiles; para su preparación se siguieren
las siguientes operaciones:
v Incorporación
de los compuestos que pueden ser esterilizados en autoclave (tanto los del MB
como los reguladores de crecimiento u otros compuestos). Ajuste del pH.
v Adición
y disolución del agar.
v Esterilización
en el autoclave.
v Incorporación
(operando en la cámara de transferencia) de las sustancias termolábiles,
previamente esterilizadas por filtración. Los compuestos esterilizados se deben
mantener a una temperatura entre 40 y 50 0C.
v Distribución
(operando en la cámara de transferencia) del medio en los recipientes de
cultivo (tubos de ensayo, cajas de Petri, etc.) previamente esterilizados en
autoclave.
Medio
MS: Es un preparado comercial que contiene las distintas sales mezcladas y
listas para ser disueltas en medio líquido. Cuando se disuelven en la cantidad
adecuada, la concentración final de los distintos nutrientes minerales es la
mostrada en la Tabla 1.
Tabla 1. Concentración de sales
minerales de la disolución nutritiva diseñda por Murashige-Skoog
Sales de macronutrientes (mg·L-1)
|
Sales de micronutrientes (mg·L-1)
|
NH4NO3
|
1650
|
KI
|
0.83
|
KNO3
|
1900
|
H3BO3
|
6.2
|
CaCl2·2H2O
|
440
|
MnSO4·4H2O
|
22.3
|
MgSO4·7H2O
|
370
|
ZnSO4·7H2O
|
8.6
|
KH2PO4
|
170
|
Na2MoO4·2H2O
|
0.25
|
|
|
CuSO4·5H2O
|
0.025
|
|
|
CoCl2·6H2O
|
0.025
|
|
|
Na2·EDTA
|
37.3
|
|
|
FeSO4·7H2O
|
27.8
|
Dicho medio básico hay que suplementarlo
con diversos componentes. Las vitaminas
están preparadas en disoluciones concentradas stock, que, al ser termolábiles, se esterilizan por filtración:
·
Vitaminas (termolábiles, STOCK 1000 v.c.):
1. Ácido
nicotínico 5 mg·L-1
2. Tiamina
hidrocloruro 5 mg·L-1
3. Piridoxina
hidrocloruro 1 mg·L-1
·
Mio-inositol 1 g·L-1
·
Sacarosa 3 %
·
Para medio sólido: agar (Phytogel, Sigma) 0.8 %
2.2 ESTERILIZACION
Son todos
aquellos métodos físico-químicos que sirven para eliminar los microorganismos y
las esporas de la superficie de instrumentos y medios de cultivo.
Desinfección:
Consiste en remover los microorganismos del material inerte como bisturí, cajas
de Petri, asas bacteriológicas entre otros.
Desinfestación:
Consiste en remover superficialmente los microorganismos con métodos suaves.
2.2.1 TIPOS DE ESTERILIZACION
2.2.2 FACTORES QUE INTERVIENEN EN EL PROCESO DE ESTERILIZACION
FISICOS
Fuego directo: mechero, colocando
azas o pinzas. Funciona para cultivos de tejidos vegetales
Agua
hervida: no
es my usada
Bacto-incinerador
Luz
ultravioleta: destruye
cadenas de ADN de los microorganismos, antes de trabajar. 380- 220 nm
Muflas-
(estufas): calor seco
de 190°C a 2hras. Se esteriliza, se colocan instrumentos como cajas de petri,
pinzas, etc. (se toma en cuenta el
TIEMPO Y LA TEMPERATURA)
Filtración:
se colocan una serie
de filtros con poros pequeños que filtran bacterias o microorganismos, esto
para compuestos termolábiles (A.I.A o AA)
Calor
húmedo: se
utilza una olla de presión, se toma en cuenta: la presión 1.2 Kg/cm2
-- 15(PSI), tiempo 20 min., temperatura 121° C.
NaClO
(hipoclorito de sodio):
utilizado a 20min. durante 1hra al 20%, sustancia a utilizar
CaClO (hipoclorito de calcio)
Oxido
de etileno
Ozono
HgCl2(bicloruro
de mercurio): es
la mejor sustancia a utilizar
H2O2(peroxido)
Nitrato
de plata
Yodex:
sustancia a utilizar
Aldehido
Fenol
Alcohol
(etanol): sustancia
a utilizar
2.3 ESTABLECIMIENTO EL CULTIVO DE TEJIDOS
El cultivo de tejidos se inicia con la disección
microscópica de la planta bajo condiciones estrictamente higiénicas con el
propósito de transferir un tejido que crece activamente (los tejidos
meristemáticos) con seguridad y limpieza dentro de un recipiente estéril sin
introducir microorganismos contaminantes. Las células y tejidos que crecerán y
se desarrollarán a partir del explanto original depende de los objetivos del
cultivo de tejidos. En algunos casos las células conformarán una masa
aparentemente desorganizada, conocida como callo, en otros estarán presentes
otras estructuras reconocibles como tallos, raíces, bulbos u otros órganos.
Estos tejidos cultivados in vitro se hallan dentro de un microcosmos
estéril de un recipiente de vidrio o de plástico, protegidos del medio exterior
no estéril. Es esencial mantener la esterilidad del medio ambiente confinado en
el recipiente, debido a que cualquier microorganismo que se gane la entrada al
mismo crecerá oportunísticamente a una velocidad mucho más rápida que los tejidos
vegetales y eventualmente colonizarán y matarán a los tejidos. Con el propósito
de sostener el vigor de los tejidos vegetales y permitir que ellos crezcan, se
multipliquen y desarrollen, esto es «cultivar los tejidos», deben proveerse
además ciertos requerimientos externos. Los tejidos pueden necesitar que se los
apoye o sean colocados sobre o en el interior de la superficie de un gel acuoso
solidificado con agar o pueden colocarse en un medio líquido. Los tejidos
también necesitarán de un suministro de los elementos minerales nutritivos que
son esenciales para el crecimiento vegetal, también posiblemente algunas vitaminas,
azúcares como fuente de energía y una
mezcla de hormonas vegetales que se conoce que controlan el crecimiento y
desarrollo de estos tejidos particulares. Para el correcto crecimiento y
desarrollo del tejido en cultivo en general es necesario el suministro de luz a
intensidades muy bajas, mucho menores que la de la luz solar. La acumulación en
las plantas de la energía de los carbohidratos provendrá de los azúcares
agregados al medio de cultivo, más que de la fotosíntesis, de manera que son
innecesarios altos niveles de luz.
2.3.1 ETAPAS DEL CULTIVO DE TEJIDOS
2.3.2 SELECCION DE PLANTAS MADRE
Con la selección de plantas madre se pretende elegir a los individuos con características más deseables para que funjan como progenitores.
Una
buena selección de plantas madre orientadas a la producción, son aquellas
plantas que han sido criadas y seleccionadas con la finalidad de poder obtener
de ellas esquejes o clones idénticos que sean 100% viables para su producción;
es decir, que las plantas o los tallos, que son capaces de formar nuevas raíces
dan lugar a nuevos ejemplares (esquejes o clones) idénticos genéticamente a la
planta original.
Las plantas madres yemeras deben ser identificadas y seleccionadas teniendo encuenta los criterios siguientes:
Es
importante recalcar que los mejores resultados se obtienen de plantas sanas y
seleccionadas por sus especiales características, con al menos dos meses de
edad, y que no hayan sido refloradas. Las plantas hembras que han sido inducidas
a florar y después a revegetar producen menos esquejes y de peor calidad,
débiles y de lento enraizado.
2.3.3 EXPLANTE
Debe
tenerse en cuenta el tamaño, la fuente, la edad fisiológica.
En cuanto
al tamaño del explante se ha postulado como regla general, que en la medida que
el explante es mas pequeño, menor es su capacidad de supervivencia, lo cual es lógico,
si se tiene en cuenta que un menor numero de células son las que deben asumir
el crecimiento y que el estrés de separación del explante es mayor, cuando es
mas pequeño. Este principio aplicable tanto a tejidos diferenciado como a
callos, se ha manifestado en distintos ensayos.
2.3.4 SIEMBRA DEL EXPLANTE
En este proceso se toma un frasco con medio de cultivo se quita el
sello, posteriormente se toma con una pinza (previamente esterilizada) el explante y se coloca
dentro del medio de cultivo, esto cuidando que la yema quede hacia arriba,tomanado en cuenta la polaridad de la planta madre; ya que puede
llegar a suceder
una polaridad invertida la cual va a depender de los ápices, raíces,
hojas, semillas,
tallos y yemas, en que se siembre la planta así.
Tambien es importante hacer esto cerca del fuego y no introducir la mano dentro
del frasco con el medio de cultivo, es también de mucha importancia no colocar
la tapa boca abajo ni tocar la parte interior de la misma. Una vez sembrado el
explante se cierra fuertemente el frasco y de esterilizan de nuevo las pinzas
para realizar el mismo procedimiento al sembrar el siguiente explante.
2.3.5 CONDICIONES DE INCUBACION
Para las condiciones ambientales de incubación es conveniente que
los cultivos sean incubados en ambientes controlados, en lo que se refiere a la
luz y a la temperatura, etc.
2.3.6 CAMBIOS FISIOLOGICOS DEL EXPLANTE
Los
cambios fisiológicos o sensibilidad dependen mucho de las condiciones en que se
encuentre la planta, y se expresa como un cambio de comportamiento ocasionado
por las condiciones de cultivo; estos cambios ocurren con frecuencia, y son
revestidos cuando el cultivo se vuelve a poner en las condiciones originales.
Los
explantes recién enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, de
manera que el éxito o el fracaso de todo el proceso dependen de la
aclimatación. En esta etapa las plantas sufrirán cambios de diferente tipo que
permitirán la adaptación de las mismas a vivir en condiciones naturales.
2.3.7 TRANSPLANTE AL SUSTRATO
Los explantes recién enraizados son muy sensibles a los
cambios ambientales, de manera que el éxito o el fracaso de todo el proceso
depende de la aclimatación. En esta etapa las plantas sufrirán cambios de
diferente tipo que permitirán la adaptación de las mismas a vivir en
condiciones naturales.
Por ello se debe dar mediante
una aclimatización, ya que una planta puede durar entre 4 a 8 semanas en
rusticar en un medio.
BIBLIOGRAFIA:
ROCA, M.W. 1991, CULTIVO DE TEJIDOS EN
LA AGRICULTURA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES, EDIT. XYZ, CALI COLOMBIA PAGS. 3-33
MUÑOZ DE MALAJOVICH, M. A. (2006)
BIOTECNOLOGÍA. EDITORIAL UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES
BARCELÓ ET AL. (1980) FISIOLOGÍA VEGETAL. EDITORIAL PIRÁMIDE
DEVLIN, R. (1976) FISIOLOGÍA VEGETAL.
EDITORIAL OMEGA.
Choppin Gregory R. QUÍMICA,
México Ed. Publicaciones Cultural, 1985, pp. 156, 247-349, 19-20
LAMA D. D. Eco fisiología del Cultivo
de Cacao, UNIVERSIDAD AGRARIA DE LA SELVA,Tingo María – Perú, 2003.
LAMA D. D. Paquete Tecnológico del
Cultivo de Cacao en la Región Alto Huallaga,Ministerio de Agricultura, Agencia
Agraria Leoncio Prado.
|
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